PCR為主的核酸擴(kuò)增技術(shù)成為當(dāng)前呼吸道病原體核酸檢測(cè)最普遍的核酸診斷方法

兒童呼吸道感染的病原復(fù)雜多樣，包括病毒、細(xì)菌、非典型病原體、真菌等。明確感染病原有助于抗微生物藥物的合理使用及呼吸道傳染病的早發(fā)現(xiàn)、早隔離、早報(bào)告和早治療。因此，快速準(zhǔn)確的病原學(xué)診斷對(duì)于呼吸道常見(jiàn)感染性疾病的臨床診療及防控具有重要意義。

兒童呼吸道感染病原體檢測(cè)方法包括分離培養(yǎng)、抗原檢測(cè)、核酸檢測(cè)和抗體檢測(cè)等，各種方法均有各自的優(yōu)缺點(diǎn)。由于病原體分離培養(yǎng)費(fèi)時(shí)費(fèi)力且敏感性較低，血清抗體檢測(cè)因有窗口期不推薦使用，故呼吸道感染病原體的主要實(shí)驗(yàn)室診斷方法為抗原檢測(cè)和核酸檢測(cè)。病原體核酸檢測(cè)方法按照技術(shù)原理又可分為核酸擴(kuò)增、核酸雜交、基因測(cè)序、規(guī)律成簇的間隔短回文重復(fù)(CRISPR)技術(shù)等。核酸擴(kuò)增包括PCR擴(kuò)增、等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)等。

二、常見(jiàn)病原體類(lèi)型

• 急性上呼吸道感染患兒，一般不常規(guī)進(jìn)行呼吸道病原體的核酸檢測(cè)，但對(duì)于有特異性抗病毒藥物的病毒感染，如流感病毒，可視條件或在其他檢測(cè)方法不能明確診斷時(shí)，使用核酸檢測(cè)，有利于抗病毒藥物的合理應(yīng)用。
• 急性下呼吸道感染患兒，或有心肺等重要臟器的基礎(chǔ)疾病、免疫功能異常的急性呼吸道感染患兒，建議根據(jù)患兒年齡、臨床特征和發(fā)病季節(jié)等及時(shí)選用可疑病原的核酸檢測(cè)方法進(jìn)行病原學(xué)確定，盡快明確病原體，有助于患兒治療方案的確定和后續(xù)管理。

• 對(duì)有急診適應(yīng)證及所有因急性呼吸道感染性疾病住院、住院期間新出現(xiàn)呼吸道感染癥狀(伴或不伴發(fā)熱)、或出現(xiàn)不明原因的呼吸窘迫、慢性心肺疾病急性惡化、血液病、腫瘤患兒出現(xiàn)中性粒細(xì)胞減少/缺乏伴發(fā)熱的。
• 有急性呼吸道感染的危重癥患兒，建議首選多重核酸檢測(cè)。若常規(guī)核酸檢測(cè)不能明確病原，推薦采用mNGS進(jìn)行病原學(xué)檢測(cè)，但其結(jié)果需要結(jié)合臨床表現(xiàn)綜合分析，必要時(shí)使用其他方法進(jìn)一步驗(yàn)證。

五、兒童急性呼吸道感染病毒病原檢測(cè)結(jié)果分析

1、不同實(shí)驗(yàn)室診斷方法各具優(yōu)缺點(diǎn)

• 目前，主要是抗原檢測(cè)和核酸檢測(cè)。抗原檢測(cè)的敏感度低，但陽(yáng)性結(jié)果有病因?qū)W意義；核酸檢測(cè)敏感度高，陽(yáng)性結(jié)果要具體分析，不一定有病因?qū)W意義。

• 對(duì)于Flu這類(lèi)以上呼吸道感染為主的病毒，鼻(咽)拭子標(biāo)本基本可滿(mǎn)足臨床檢測(cè)需求。
• 下呼吸道感染為主的病毒在感染上呼吸道上皮細(xì)胞1~3 d后迅速擴(kuò)散至下呼吸道。
• 對(duì)于RSV、HAdV、PIV、SARS-CoV-2等多數(shù)能夠引起下呼吸道感染的呼吸道病毒而言，鼻咽分泌物、鼻咽拭子、肺泡灌洗液等標(biāo)本類(lèi)型更為適合。
• 在病毒載量未達(dá)到抗原檢測(cè)閾值的病程極早期(如流感樣病例發(fā)熱1~2 h)或者病程后期，選擇抗原檢測(cè)，可能就會(huì)得到陰性結(jié)果。因此，在這2個(gè)階段，最好選用核酸檢測(cè)。在疾病恢復(fù)期，核酸檢測(cè)也可能轉(zhuǎn)為陰性，此時(shí)可考慮抗體檢測(cè)，最好是雙份血清檢測(cè)。

• 因?yàn)楹怂釞z測(cè)的高靈敏度，在部分無(wú)癥狀感染者中也可檢測(cè)到病毒。
• 一份標(biāo)本中檢測(cè)到多種病毒的情況很常見(jiàn)，但不是所有檢測(cè)到的病毒與現(xiàn)癥感染均相關(guān)。
• 大量研究表明，MRVD在下呼吸道感染兒童中為20%~40%，但這一現(xiàn)象在成人中不太常見(jiàn)。在許多研究中，人博卡病毒與人鼻病毒是最常見(jiàn)的MRVD 。
• 核酸檢測(cè)陽(yáng)性不一定反映病毒活躍復(fù)制，但相對(duì)高拷貝數(shù)的病毒將增加其致病作用的可能性。除提示急性感染外，核酸檢測(cè)陽(yáng)性還可能反映急性感染(如人博卡病毒)、潛伏性慢性感染(如部分腺病毒)或無(wú)癥狀急性感染(如人鼻病毒)后的長(zhǎng)時(shí)間的病毒排毒。

六、核酸檢測(cè)結(jié)果對(duì)臨床用藥指導(dǎo)價(jià)值

1、抗菌藥物的應(yīng)用和選擇原則

• 若考慮為致病病原體，具體抗菌藥物需根據(jù)當(dāng)?shù)啬退幈O(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)和可及性進(jìn)行選擇。有些病原已經(jīng)可以通過(guò)核酸檢測(cè)耐藥基因/耐藥突變的存在，如耐青霉素肺炎鏈球菌、碳青霉烯類(lèi)耐藥革蘭陰性桿菌、耐大環(huán)內(nèi)酯的肺炎支原體/百日咳鮑特菌、耐利福平的結(jié)核分枝桿菌等，這些結(jié)果對(duì)抗菌藥物的選擇有較好的參考意義，同時(shí)也要充分考慮患兒對(duì)治療的實(shí)際反應(yīng)。
• 當(dāng)病毒核酸檢測(cè)陽(yáng)性時(shí)，如果患兒出現(xiàn)重癥的早期征象、早期抗病毒治療臨床好轉(zhuǎn)后病情再次惡化或應(yīng)用抗病毒治療3~5 d仍無(wú)好轉(zhuǎn)，應(yīng)該經(jīng)驗(yàn)性治療可能合并的細(xì)菌感染，并在治療的同時(shí)行進(jìn)一步檢查。

• 兒科醫(yī)師應(yīng)盡量明確病毒感染的病原學(xué)，嚴(yán)格掌握抗病毒藥物的適應(yīng)證，根據(jù)患兒病情輕重及藥物本身理化性質(zhì)，按照5R原則(正確的患者、正確的時(shí)間、正確的藥物、正確的劑量及正確的給藥途徑)進(jìn)行抗病毒治療。

1、常見(jiàn)呼吸道感染性疾病與病原體

2、不同地區(qū)兒童呼吸道感染病原體特征

武漢兒童醫(yī)院 在 10,206 名患者中發(fā)現(xiàn)了一種或多種病原體，肺炎支原體、腺病毒和乙型流感病毒是主要的傳染原。共檢出2391例病原菌混合感染，其中肺炎支原體是最常見(jiàn)的病原菌。合并感染中最常見(jiàn)的病原體是肺炎支原體和乙型流感病毒。        

其他文獻(xiàn)數(shù)據(jù)：

3、目前已有呼吸道病原體檢測(cè)試劑類(lèi)型：

4、已發(fā)布的試劑盒指導(dǎo)原則及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)：《呼吸道病毒多重核酸檢測(cè)試劑盒技術(shù)指導(dǎo)原則》2019《呼吸道病毒多重核酸檢測(cè)試劑盒》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 實(shí)施時(shí)間：2022-12-01.......

信息來(lái)源：

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